This video talks about Plasmid DNA isolation | Alkaline lysis method | molecular biologyFor Notes, flashcards, daily quizzes, and practice ... ... <看更多>
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變株,利用定點突變設計具有6 個Histidine 的核苷酸序列嵌入質體上之GFP 序 ... 培養14~16 小時的菌液以(VIOGENE)抽plasmid DNA Kit,抽取質體DNA,. ... <看更多>
抽質體solution 在 [求救] 請問關於抽取plasmid的問題- 看板Biotech - 批踢踢實業坊 的推薦與評價
我目前是分生新手
有幾個疑問想要問各位先進
我目前在抽取plasmid的實驗
使用的方法是kit的步驟
但是有時候不知道哪邊出錯
取得plasmid 有時候會失敗
有時候會成功
不知道是哪邊出了問題
還有抽取plasmid kit的spin column 可以重複使用嗎?
因為幾次時驗完發現使用量非常大(過濾膜→spin column、solutionI、II、III)
抽取plasmid步驟:
1.離心菌體沉澱物
2.加入200uL solution I,用pipet使其懸浮
3.加入200uL solution II,上下搖晃數次,等溶液變透徹,但沒超過五分鐘
4.加入200uL solution III,上下搖晃後離心
5.吸取上層澄清液,加入spin column離心
6.加入600uL wash solution,離心 重複兩次
7.讓酒精乾,加入40uL elution solution 靜置
7.跑電泳膠片 DNA:dye=4:1
成功率70%
有考慮想要使用傳統的實驗步驟
及從膠體回收DNA目前很像都沒有成功…
因為再次跑膠片卻都沒有band出現
這邊我想要抽取的DNA大小約0.6kbp(從plasmid上面切下來的片段)
回收膠片dna也是用kit的步驟
回收膠體步驟:
1.割下欲回收膠片
2.加入略大於膠體體積的binding solution,加熱 使膠體溶解
3.加入spin column 離心過濾,再加入700uL binding solution 離心
4.wash solution 600 uL,離心 重複兩次
5.酒精乾,加入elution solution 50 uL
6.跑膠片
目前做的實驗沒有我切下來的DNA band出現
不知道在做抽取plasmid與膠片回收的實驗
有什麼需要注意 才可以使成功率提升
謝謝
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※ 發信站: 批踢踢實業坊(ptt.cc)
◆ From: 140.113.77.200
有時成功 有時失敗 沒有一個穩定的100%成功 還是我自己的問題?
感謝 提供意見
那怎樣才會有再現性 就以抽取DNA與回收膠片的步驟
※ 編輯: syming 來自: 140.113.77.200 (01/12 22:08)
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